产品货号：
SYA068
中文名称：
副溶血性弧菌单重荧光PCR检测试剂盒
英文名称：
产品规格：
48次/盒
发货周期：
1～3天
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一、简介：
本试剂盒用一对副溶血性弧菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对副溶血性弧菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途：
该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌，用于副溶血性弧菌(VP)感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成：(48T)
四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为12个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
水样便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 样本前处理：
水样便13000rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入等体积的核酸提取液(固体标本加入50uL核酸提取液)，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(VP-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(VP-PTC)4μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1）阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2）阳性对照(VP-PTC)：均产生扩增曲线。
（3）以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1）在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明副溶血性弧菌核酸阳性。
（2）Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明副溶血性弧菌核酸阴性。
（3）如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4）对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行副溶血性弧菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明副溶血性弧菌核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
（1）初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2）所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3）PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4）样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5）盒内所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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本试剂盒用一对副溶血性弧菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对副溶血性弧菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途：
该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌，用于副溶血性弧菌(VP)感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成：(48T)
| 组份 | 数量 | 规格 |
| VP反应液(VP-qPCR MIX) | 1管 | 1mL/管 |
| 核酸提取液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 250μL/管 |
| VP阳性对照(VP-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
四、
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为12个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
水样便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 样本前处理：
水样便13000rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入等体积的核酸提取液(固体标本加入50uL核酸提取液)，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(VP-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 20μL | N×20μL |
| 酶混合液 | 1μL | N×1μL |
| 总量 | 21μL | N×21μL |
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(VP-PTC)4μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：
| 预变性 | 1循环 | 94℃ for 2 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 94℃ for 15 sec 55℃ for 30 sec |
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1）阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2）阳性对照(VP-PTC)：均产生扩增曲线。
（3）以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1）在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明副溶血性弧菌核酸阳性。
（2）Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明副溶血性弧菌核酸阴性。
（3）如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4）对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行副溶血性弧菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明副溶血性弧菌核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
（1）初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2）所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3）PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4）样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5）盒内所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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